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实验室小型发酵罐染菌及其解决办法
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  实验室小型发酵罐染菌及其解决办法

  无菌操作都是相对的,没有绝对的无菌操作,无菌和染菌是一个概率问题,我们要把染菌的概率降低到最小,就能实现无菌培养。

  所有可能染菌的情况和相应的解决办法

  1.进气过滤器坏掉了,打开过滤器夹套,查看过滤器是否有明显的裂缝,是否有发酵物料的堆积,是否有其他杂质,是否有积水排不干净!

  2.发酵罐有地方漏,保持正压,用肥皂泡检测,一把情况如果整个 发酵过程中保持正压,即便有漏点,也问题不大,尾气排气就是很大的一个 孔。但是进罐管道是绝对不能有漏点的!

  3.发酵罐中死角,这一点比较重要,所有开口的地方,都要排查,拧下来,用酒精擦洗。

  4.机封,漏油,这个一般不可能出现

  5.发酵灭菌操作

  小发酵罐 灭菌不存在节约能源的问题,特别是好些小发酵罐不需要蒸汽接触,因此发酵灭菌相对容易,但还是有些地方容易出问题:

  (1)蒸汽开过猛,发酵罐假压力出现,特别是对于蒸汽进罐的发酵罐,加热过快,出口流量低,罐压迅速上升,而管内冷空气没有排除干净,

  刚开始罐底主蒸汽肯定是开到最大后往回打半圈,防止假压的关键在于排气阀的控制,升温阶段排气全开,至100℃以后,收一半排气,快接近120前收紧排气和进气,微调进排气,保压保温,经济节能。

  (2)灭菌没有开搅拌,物料热传递效率慢,形成假压力,可以 在温度升到90℃,多维持一会,有些时候为了保护电机,在温度升到100℃以上就会停止搅拌。

  (3)蒸汽进罐不分主次,也容易出现假压力,特别是有些不该主要进蒸汽的地方,比如 管道在液面以上的蒸汽进口,小罐一般不存在这个进口。

  (4)存在没有灭到的地方,这一点对于刚接触发酵罐的新手比较容易发生, 可以把握一句话:所有进罐和出罐的管道阀门在灭菌的时候都必须是烫手的,可以用手试探一下!

  (5)蒸汽进和尾气阀门避免过大幅度调节,在灭菌阶段,过快调节 ,会出现压力波动较大,起泡沫等现象。

  (6)尽量避免泡沫过多,泡沫过多容易灭菌不彻底

  (7)物料,对于容易结块的物料一定要注意操作,不能使其在罐内结块,小罐可以在外面提前溶解,再加进去!

  (8)空气过滤器灭菌不彻底,根据发酵罐不同,要看蒸汽过滤器是否和发酵罐一起灭,是否有管道存在漏灭的地方,有没有吹干。

  6.发酵接种和补料操作

  接种补料是小罐染菌非常主要的一方面!

  (1)如果 罐非常小,建议采用火焰接种,在较短的时间内接进去大量目的菌,可以减少染菌 可能性。但是在火焰接种操作的时候,要操作好,注意以下几点:①接种前将压力卸掉一个比较低的值,防止开盖后,直接 冲灭酒精棉②酒精棉可以用80%以上的酒精,要多放点,防止冲灭 ③接种前,用酒精棉烧一下接种口附近,特别是对于一些 进口罐,没有设计比较好的接种口④开口后,可以适当增加 进气速度,防止外面的空气进去⑤控制手套上水的量,不要让其有滴水的情况出现,容易滴进罐里面⑥操作迅速 ,熟练,准确

  (2)补料 ,检查补料过滤器是否完好,特别是对空间环境杂菌特别多的地方,很重要;补料管道有没有破裂;插针的位置加垫子,一般不会有染菌的问题。

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